光學顯微鏡的觀察方式中，熒光觀察是一種重要且廣泛應用的技術。以下是對熒光觀察方式的詳細介紹：
一、熒光現象
熒光是一種光致發光現象，指的是某些分子在吸收特定波長的光線（激發光）后，能夠再發射出其他波長的光線（發射光）。這種分子被稱為熒光團，其激發光譜和發射光譜之間存在差值，發射光能量比激發光低，波長比激發光長，這個差值稱為“斯托克斯位移”。熒光現象包括自發熒光與繼發熒光兩種：
自發熒光：是指樣品自帶熒光團，經照射后就能發出熒光，如葉綠體。
繼發熒光：也稱二次熒光，樣品經照射后不能發出熒光，需先用熒光染料標記處理，再經照射才能發生熒光。熒光顯微鏡主要利用的是繼發熒光。
二、成像原理
某些分子能吸收特定波長的光線，然后再發射出更長波長的光線。光譜波長從短到長，顏色分別是“紫外-紫-藍-綠-黃/橙-紅-紅外”，短波長激發可以激發長波長發射，比如紫外激發藍色發射，藍光激發綠色發射。在熒光顯微鏡中，通常使用熒光染料或轉染技術，將熒光團結合到目標組織或細胞器等結構上，再用熒光顯微鏡激發觀察，從而實現高特異性、高靈敏度觀察。
三、熒光顯微鏡的關鍵部件
熒光顯微鏡是利用熒光特性進行觀察、成像的光學顯微鏡，其構造主要包括以下幾個關鍵部件：
熒光光源：用于提供熒光激發光，核心規格是光譜特征波長，要求能覆蓋染料的激發特征波長，并提供足夠光強。常用的熒光光源有汞燈、氙燈、金屬鹵素燈以及LED熒光光源。其中，LED熒光光源在開關性能、使用壽命、光強可控性和免維護等方面具有顯著優勢。
熒光激發塊：一組激發塊由激發濾光片、發射濾光片和二向分光鏡組成。激發濾光片只讓特定波長激發光通過，用以激發特定熒光染料；發射濾光片匹配熒光染料特性，只讓特定波長的發射熒光通過；二向分光鏡反射激發波段的光，透過發射波段的光。激發塊的作用是篩選特定的激發光和發射光，透過目標熒光信號。其核心規格是光譜波長參數，其波長參數與熒光染料匹配度會極大影響熒光觀察效果，匹配不佳會帶來更多背景雜訊、更低的信噪比。
熒光臂/熒光模塊：用來安裝熒光光源和激發塊的載體，核心規格是通道數和光源接口，影響配件適配和擴展性。此外，熒光顯微鏡還可能配備有外置快速轉輪等部件，以實現高速多色實驗。
四、熒光觀察的成像特點
熒光觀察成像特征是暗背景和熒光色的目標信號，這帶來了以下應用優勢：
高特異性和高靈敏度：可以特異性標記微小的細胞結構、分子、基因、蛋白、化合藥物等。
多通道檢測：可標記多種染料用于指示不同部位實現多通道成像，適合研究復雜生物系統的相互作用。
適用范圍廣：可實現活體、離體、標記、自發等多種方式的熒光成像，對樣本限制較少。
五、熒光觀察方式的主要應用
熒光顯微鏡廣泛應用于細胞生物學、神經生物學、植物學、微生物學、病理學、遺傳學以及醫療診斷、產業應用等領域。
生物學研究：借助熒光染料標記，熒光顯微鏡可準確而詳細地識別細胞和亞微觀細胞成分和活動，如細胞和亞微觀細胞結構、細胞生理、動物生理病理等。
醫療診斷：熒光顯微鏡可用于原位熒光雜交技術（FISH）檢測癌癥、呼吸道病毒檢測、真菌鏡檢等。
產業應用：在材料科學領域，熒光顯微鏡可用于檢測礦物、紡織、紙張等材料的成分；在藥品檢測方面也有重要應用。
綜上所述，熒光觀察方式作為光學顯微鏡的一種重要觀察手段，具有廣泛的應用前景和重要的研究價值。
